鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗的制造方法

来源:http://www.jemmvision.com 作者:饲料营养 人气:171 发布时间:2019-12-02
摘要:鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗的制造方法 鸡新城疫是由病毒引起的一种急性败血性传染病,俗称鸡瘟,即所谓亚洲鸡瘟。本病一年四季均可发生,尤以寒冷和气候多变季节多发。各种日龄的鸡

  鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗的制造方法
鸡新城疫是由病毒引起的一种急性败血性传染病,俗称鸡瘟,即所谓亚洲鸡瘟。本病一年四季均可发生,尤以寒冷和气候多变季节多发。各种日龄的鸡均能感染,20~60日龄鸡最易感,死亡率也高。
由于其易感性强、死亡率高,所以对于该病是以免疫预防为主。疫苗分灭活苗和活苗,活苗主要有I系,Ⅱ系(B1株)、Ⅲ系(F系)、IV系(Lasota株)、克隆一30等。I系为中等毒力疫苗对雏鸡毒力较强可出现症状甚至引起死亡,但能较快产生坚强免疫力,多用于2月龄以上的鸡或紧急预防接种。
1 毒种
鸡新城疫I系苗毒种,由中国农业部兽医药品监察所供给。作为I系苗毒种的条件是:对鸡胚的最小致死量不低于10~/mL,鸡胚于接种后24~72h内死亡,胚体病变明显,对红血球凝集在1:80以上;毒种对鸡的最小免疫量应不低于10.6/mL;安全、无菌。
2 I系苗(湿苗)的制造方法
将健康的种鸡所产新鲜卵(一般不应超过7天),除去卵壳外污物后,放入38.5~39.0。C,相对湿度在60%~70%孵卵箱内孵化9~10日,作为制苗鸡胚的来源,鸡胚接种前,应照蛋挑选生活力强的发育胚,并划好气室部位和接种部位,凡生活力弱与死胚均不要。
毒种移种时用无菌生理盐水将毒种作1:100稀释,接种9~10日龄鸡胚的尿囊腔内,每胚0.1mL,接种以后融化石腊将卵壳上的接种孑L封闭,继续置孵卵箱内孵化。此后,每日上下午各照蛋1次。胚胎应于接种后24~48h内死亡(一般36h前后死亡),将死胚卵气室向上,置o~10℃冷却4~24h,凡在24h内和48h以后死亡的胚卵均弃去不用。
将冷却后的死胚卵取出,气室部向上并涂擦5%碘酊。用灭菌镊子敲破气室部位的卵壳并剔除之,揭去卵壳膜,剪破绒膜和羊膜,以无菌吸管吸取尿囊液和羊水,装入灭菌瓶内,若干胚的胚液混合为一组,并立即加入青霉素、链霉素各500U/mL。放入冰箱保存,经检验后即成疫苗。在收获疫苗时,应观察胚体病变情况是否良好(胚体全身充血,头、胸、背、翅和趾部有小出血点)。注意胚液是否清朗,若胚体无病变,胎儿腐败,胚液混浊者应废弃,亦可同时收获胚体,和胚液一起磨碎,制成全胚疫苗。
收获的鸡胚液应逐瓶进行无菌检验,即每瓶抽疫苗0.2mL,分别接种于鲜血斜面和熟肉基内。在37℃培养72h,应无细菌生长,然后将无菌生长之疫苗混合后,分装小瓶或安瓿内。每瓶0.5~1.0mL。瓶上或安瓿上要注明疫苗名称、批号及收获日期。
3 疫苗检验
每批疫苗制好后,在使用前须做以下3项检验,均合格者方可使用。
无菌检验:每批疫苗任抽5瓶作为样品,方法同上,应无细菌生长,做细菌培养同时,亦可注射小白鼠若干只,每只皮下注射0.2mL,观察10天,应全部不死。若有细菌生长或小白鼠死亡,此苗废弃。
安全试验:用4~12个月龄未经鸡新城疫疫苗免疫过的健康鸡3只,每只鸡肌注100倍稀释疫苗1mL,观察10~14天,应无任何反应,或有轻度反应。且在14日内恢复者,认为合格,有重反应不能复原时,应予重复检验1次。
效力试验:①选取4~12月龄的健康鸡若干只,分为二组,一组为对照组,所有鸡必须没有感染过鸡新城疫或没有接种过本疫苗。如情况不明,应于试验前,每只鸡翅静脉抽血分离血清作血凝抑制试验,血凝抑制价在1:20以下者才能供试验用,但是超过1:20不能用来试验。②试验组每只鸡以1000倍稀释的疫苗肌注1mL。观察10~14天后,与对照组一起以鸡新城疫强毒攻击。攻击量每只鸡肌注1000倍稀释的新鲜鸡胚强毒液1mL。观察10~14天,试验组免疫鸡应全部健活,而对照全部发病,并且至少死亡2/3方能合格,如果对照鸡不能全部发病或全部发病而死亡少于2/3时,可重复试验1次,如免疫鸡发病或死亡,这批疫苗视为无效,予以废弃。
4疫苗使用与保存
使用方法:①本苗专供2个月以上鸡使用,初生雏鸡禁用。②用灭菌生理盐水或蒸馏水或冷开水(不可用热水或温水)将本苗稀释100倍,以消毒的钢笔尖蘸取稀释苗,刺入鸡翅膀内侧无血管处皮下(蘸、刺各2次)。或皮下注射0.1mL,也可稀释1000倍,肌注1mL。③稀释后疫苗须冷藏,并于当日用完,次日无效。④疫苗注射后3~4天,即可产生免疫力。免疫期成年鸡为1年,2月龄鸡为半年。
保存:鸡胚液收获日期起,一15℃不超过20天,15~25℃不超过14天;25~30℃不超过7天。

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