鸡新城疫血凝抗体监测应注意的问题

来源:http://www.jemmvision.com 作者:政策标准 人气:105 发布时间:2019-11-23
摘要:(辽宁省铁岭市动物检疫站 铁岭 112000) 鸡新城疫病是危害养鸡的一种严重传染病,对新城疫的防治要按免疫程序进行免疫。但首免日龄的确定、免疫后机体反应的效果如何,及其间隔

  

  (辽宁省铁岭市动物检疫站 铁岭 112000)

  

  鸡新城疫病是危害养鸡的一种严重传染病,对新城疫的防治要按免疫程序进行免疫。但首免日龄的确定、免疫后机体反应的效果如何,及其间隔多长时间进行第二次免疫,都取决于机体内的抗体水平。抗体可存在动物的血清中,可以通过免疫监测的方法检测出来。但是在免疫监测的实际操作中,监测结果受到诸多因素的影响。就在检测鸡ND抗体效价时应该注意如下问题,综述如下:

  

  1 抗原方面

  

  免疫监测实质上是一个抗原抗体反应的过程。在此,抗原的效价一定得标定正确,每次监测之前一定先准确测定抗原的效价,应该是同时测2~3遍取其平均值,然后根据其准确效价配制所需病毒液(如4单位病毒)。

  

  2 抗体方面

  

  检测抗体水平,需取血清为检测样本。要采样的过程中及盛放样本的试管不能污染,不能含有杂质,不能含有与抗体无关的蛋白质。也不能加有抗凝剂,不能有溶血物,否则血清就不易分离或影响其抗体的效价。分离好的血清应该是淡黄色透明液体。

  

  3 红细胞方面

  

  红细胞的制备非常重要。红细胞应采自没有免疫过的成公鸡,未成熟的公鸡红细胞较脆弱,易溶血,不能用。红细胞经过反复离心洗涤后配成0.75%为最好,实践证明,0.5%和1%的红细胞都不如0.75%的好,这是由于现在普遍使用的微量法测定,在96孔反应板上进行,红细胞量的多少也会影响结果,过多过少时都会影响结果的准确性。

  

  4 操作过程

  

  免疫监测是一种血清学试验,应以科学的角度来对待,应该注意好如下几点:

  

  4.1 加样时,各种成分一定要掌握准确的剂量。移液器是定量的,但受操作者手用力的影响,用力大小不匀时,吸取的量就不均匀,用力正好在标定的刻度上,能吸取均匀等量的样液,这是一个要求技术人员反复操作熟练的过程。注意在取样时每次取样吸头中不得含有气泡,如果有气泡存在会占有体积,取样量又会因此而不准确,而造成检测结果的误差。

  

  4.2 在每一次做抗体监测时都应该做回归试验,并且每个反应板都要做一个回归。还必须设有标准阳性对照和标准阴性对照,这样才能反映出每一个反应板中各个待测样品的真实情况。由于配备好的4单位病毒受外界因素影响,时常发生变化,可以根据回归试验的结果来判断样品检测结果的准确性。

  

  4.3 抗体免疫监测试验在室内温度下均可以进行,但是温度不同结果出现的时间是不同的,22~28℃条件下最适宜,有条件的可在恒温箱内进行反应。没有恒温箱的在自然条件下反应也可以,但是要掌握好观察结果的时间。

  

  4.3 操作时加入抗原和抗体后要在微量振荡器上进行一次振荡(1min),让其作用后再加入红细胞,再进行第二次振荡(1min),两次振荡的目的是使各样品充分混匀,达到充分作用的效果。然后放在22~28℃的温箱内或室温下作用,等候观察结果。

  

  5 观察和记录结果

  

  反应分两个阶段,第一阶段是抗原抗体特异性结合阶段,发生得很快,但不是显肉眼可见现象;第二阶段是肉眼可见阶段,需要电解质参与,并受多种因素的影响。如果在25℃左右反应,15~18min可以观察结果;如果置于15~20℃下则需要18~22min观察结果;如果在15℃以下,则需要25min后观察结果等。观察结果时要边观察边记录,并在2~3min内再重复观察记录一次结果,核对一下第一次的结果。如果两次的结果相同,只是第二次更明显,可以说是检测成功。如果有可疑的样本应间隔2min再观察一次,仍不能准确判定结果的应重复操作一次。

  

  6 监测结果的实际应用

  

  一般鸡新城疫抗体免疫接种临界HI价为1:16~32或40,雏鸡免疫器官7日龄接近发育成熟,鸡体对新城疫疫苗的免疫应答是随龄期的增长而加强。科学推算首免日龄和加强免疫时间的公式是:雏鸡最适首免日龄=半衰期×(1日龄雏鸡HI抗体效价几何均数的以2为底的对数值-4)+5。

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